PRACTICA:DETERMINACION DE IDENTIDAD GENETICA 15/5/15

PRIMERA PARTE

MATERIAL:
Gradilla
Micropipeta
Vaso de precipitado
Centrifuga
Papel para film
Pipeta de vidrio de 5 ml
Prepipeta
Tubos de ensayo
Ependoff
Rotulador de vidrio
Palillo
Bata
Guantes
Papel de fieltro
REACTIVOS:

• Suero salino
• Matriz infangene(Purificador de ácidos nucleicos ,extrae ADN)

MUESTRA:
Mucosa bucal
FUNDAMENTO:
Repiticion de secuencias de pequeños fragmentos de ADN. A cada persona se le repite un numero determinado .No es único,pero si característico de cada individuo ,y este es conocido como huella genetica


DESARROLLO:
1.Añadimos en un vaso de precipitado suero salino
2.Colocamos un tubo de ensayo en la gradilla , y depositamos con una pipeta de vidrio de 5 ml  , 3 ml de suero en el tubo
3.Nos enjuagamos la boca con agua y rascamos ambos lados internos de la misma con un palillo
4.Introducimos el palillo en el tubo de ensayo y lo mezclamos unos 2 minutos aproximados
5.Extraemos de ahí 1.4 ul y lo introducimos en un eppendof
6.Lo centrifugamos a 8000 rpm durante 5 minutos
7.Retiramos el sobrenadante
8.Añadimos en el eppendor 70 ul de matriz instangene , e incubamos en una maquina de baño seco durante 10  minutos a  100 grados centigrados
9.Dejamos enfriar y centrifugamos a 13.000 rpm durante 30 minutos
10.Por ultimo extraemos 10 ul del tubo de eppendof  y lo depositamos en otro tubo nuevo
11.Lo congelamos

SEGUNDA PARTE

MATERIAL:

Vaso de precipitado

Bata

Guantes

Micropipeta de 2 ul , 18.5 ul y 2.5 ul

Puntas de micropipeta

Centrifuga

Termociclador

Tubo de ready to go

Gradilla de corcho

Rotulador de vidrio

REACTIVOS:

• Oligo 1   2 ul
• oligo 2  2 ul
• Agua destilada 18.5 ul

MUESTRA:

2.5 ul de eppendor preparada en la primera parte

DESARROLLO:

1.Preparamos el agua destilada en un vaso de precipitado

2.Cogemos una gradilla de corcho y colocamos el eppendof de nuestro ADN y el tubo ready to go

3.Extraemos 2.5 ul de nuestro ADN y lo depositamos en un ready to go y añadimos al mismo 2 ul de aligo 1 y 2 ul de oligo 2 y finalmente 18.5 ul de agua destilada

4.Mezclamos suavemente

5.Centrifugamos un golpe

6.Colocamos el tubo ready to go en el termociclador , cerramos la tapa y ya comienza los 30 ciclos

7.Lo retiramos y se guarda en frigorífico

TERCERA PARTE

MATERIAL:

Balanza

Pipeta de 10 ml

Vaso de precipitado

Rotulador de vidrio

Microondas

Matraz

Probeta de 100 ml

Micropipeta de 1.5 ul

Puntas desechables

Bata

Guantes

Vidrio de reloj

REACTICOS:

• Agua destilada
• Tampon TAE 10 ml
• AGarosa 1.5 gr
• Red safe nucleic acid staining solution

DESARROLLO:

1.Pesamos 1.5 g de agarosa en la balanza y la depositamos en una probeta de 100 ml

2.Añadimos 10 ml de tampón en la probeta de 100 ml y  depositamos la disolución de agarosa

3.A continuación ,enrasamos hasta 100 ml de agua destilada

4.Lo depositamos la mezcla en un matraz Erlenmeyer

5.Calentamos en microondas unos segundos

6.Lo sacamos y lo movemos un poco  y lo volvemos a calentar , hasta ver que esta totalmente diluida la mezcla

7.Dejamos enfriar unos minutos

8.Añadimos 1.5 ul de red safe nucleic acid staining solution y  ya tenemos lista la agarosa para realizar la electoforesis que seria el ultimo proceso

CUARTO PROCESO

MATERIAL:

Balanza

Vidrio de reloj

Prepipeta

Pipeta de vidrio de 2 ml

Probeta de 10 ml

Cubeta especial

Cinta adhesiva

Fuente de alimentación

Eppendof

Micropipeta de 10 ul y 5 ul

Puntas desechables

Bata

Guantes

Papel de fieltro

REACTIVOS:

• Ladder
• Agarosa
• Tampon de carga(glicero 30% , azul de metileno y agua destilada)
• Tampon TAE

MUESTRA:

Primer eppendof:9 ul de ADN replicado + i ul de tampón de carga

Segundo eppendof: 4.5 ul de ladder + 0.5 ul de tampón de carga

DESAROLLO:

1.Colocamos cinta adhesiva en la cubeta donde se va a depositar agarosa

2.Depositamos agarosa lentamente para que no se produzcan burbujas y lo dejamos actuar unos 30 minutos aproximadamente

3.Retiramos las dos peines y lo colocamos en la bandeja de fuente de alimentación .

4.Los palillos deben estar en cátodo , y la muestra debe moverse hacia el ánodo

5.Añadimos el tampón TAE

6.Añadimos control en las esquinas

7.A continuación ,depositamos en pocillos la muestra , 9 ul de DNA + 1 ul de tampón de carga.

8.Una vez llenados los palillos conectamos los cables en la fuente de alimentación y aplicamos una corriente de 120 voltios durante 30 minutos

9.Visualizamos los fragmentos de ADN  en luz ultravioleta