PRACTICAS DE HEMATOLOGIA

1 TRIMESTRE
BLOQUE I: MORFOLOGÍA
 DICHAS POR EL PROFESOR:
DISOLUCIÓN DE AGUA Y SAL
MEDICIÓN CON UNA BURETA
MEDICIÓN CON UNA PIPETA GRADUADA
SUERO SALINO
SALIVA I
EPITELO DE CEBOLLA
DEL LIBRO:
PRACTICA I : INTRODUCCION AL MANEJO DEL MICROSCOPIO

PRACTICA II: ESTUDIO MICROSCOPICO DE  LA CRISTALIZACION DE LA SALIVA

PRACTICA III:  PREPARACION DE SANGRE EN FRESCO

PACTICA IV: TINCION SUPRAVITAL CON AZUL DE METILENO

PRACTICA V:  REALIZACION DE UNA EXTENSION SANGUINEA

PRACTICA VI: PREPARACION DE GOTA GRUESA

PRACTICA VII: TINCION DE GIEMSA

PRACTICA VIII: TINCION DE WRIGHT

PRACTICA IX: TINCION DE PANÓPTICO RÁPIDO

PRACTICA X: CONTAJE DE RETICULOCITOS

PRACTICA XI : DETECCIÓN DE CUERPOS DE HEINZ

PRACTICA  XII:  INTERPRETACION CLINICA

2 TRIMESTRE
BLOQUE I :MORFOLOGÍA

PRACTICA I:ESTUDIO DE UN CONCENTRADO DE LEUCOCITOS

PRACTICA II:RECUENTO DE PLAQUETAS EN FROTIS SANGUINEOS

PRACTICA III:DETERMINACION DEL INDICE DE LOBULARIDAD(IL)

PRACTICA IV:DETECCION DE CRIOGLOBULINAS

BLOQUE II: HEMATIMETRIA

PRACTICA XIII:VISUALIZACION DE UNA CAMARA DE RECUENTO

PRACTICA XIV:RECUENTO DE HEMATIES

PRACTICA XV:DETERMINACION DEL VALOR HEMATOCRITO MEDIANTE EL MICROMETODO

PRACTICA XVII:CALCULO DE LOS INDICES ERITROCITARIOS

PRACTICA XVIII:DETERMINACION DE LA SIDEREMIA

PRACTICA XIX:ELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINAS

PRACTICA XX:RECUENTO DE LEUCOCITOS (WBC)

PRACTICA XXI:RECUENTO DE PLAQUETAS CON HEMOCITOMETRO


BLOQUE III:COAGULACION

PRACTICA XXIV:DETERMINACION DE HEMOGLOBINA EN SANGRE

PRACTICA XXVI:ESTUDIO DE LA FRAGILIDAD OSMOTICA DE LOS HEMATIES

PRACTICA XXVII:PRUEBA DE LA SACAROSA

PRACTICA XXVIII:DETERMINACION DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (VSG)

PRACTICA XXIX:PRUEBA DE RUMPEL-LEEDE

PRACTICA XXX:DETERMINACION DEL TIEMPO DE HEMORRAGIA CON LA TECNICA DE DUKE
PRACTICA XXXI:DETERMINACION DEL TEST DE HOWELL

PRACTICA XXXII:DETERMINACION DEL TIEMPO TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA(TTPA)

PRACTICA XXXIII:PREPARACION DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA

PRACTICA XXXIV;DETERMINACION DEL TIEMPO DE PROTROMBINA(TP)

PRACTICA XXXV:DETERMINACION FUNCIONAL DE FIBRINOGENO

PRACTICA XXXVIII:PRUEBA DE MEZCLA CON PLASMA NORMAL

PRACTICA XXXIV:TIEMPO DE COAGULACION

3 TRIMESTRE

BLOQUE IV:BANCO DE SANGRE

PRACTICA XLII:PREPARACION DE SUSPENSION DE HEMATIES TIPADOS

PRACTICA XLIII:DETERMINACION DEL GRUPO Rh EN TUBO

PRACTICA XLIV:DETERMINACION CELULAR EN PORTA

PRACTICA XLV:DETERMINACION CELULAR EN TUBO













PRACTICA XLVI:DETERMINACION SERICA DEL GRUPO AB0

PRACTICA XLVII:DETERMINACION DEL GRUPO Rh EN PORTA



PRACTICA XLVIII:DETERMINACION DEL FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA Rh

PRACTICA XLIX:DETERMINACION DE UN Du

PRACTICA LI:PRUEBA CRUZADA MAYOR

PRACTICA LII:DETERMINACION RAPIDA DE HEMOGLOBINA




PRACTICA LIII:DETERMINACION DE INDENTIDAD GENETICA

PRACTICA:DETERMINACION DE IDENTIDAD GENETICA 15/5/15

PRIMERA PARTE

MATERIAL:
Gradilla
Micropipeta
Vaso de precipitado
Centrifuga
Papel para film
Pipeta de vidrio de 5 ml
Prepipeta
Tubos de ensayo
Ependoff
Rotulador de vidrio
Palillo
Bata
Guantes
Papel de fieltro
REACTIVOS:

• Suero salino
• Matriz infangene(Purificador de ácidos nucleicos ,extrae ADN)

MUESTRA:
Mucosa bucal
FUNDAMENTO:
Repiticion de secuencias de pequeños fragmentos de ADN. A cada persona se le repite un numero determinado .No es único,pero si característico de cada individuo ,y este es conocido como huella genetica


DESARROLLO:
1.Añadimos en un vaso de precipitado suero salino
2.Colocamos un tubo de ensayo en la gradilla , y depositamos con una pipeta de vidrio de 5 ml  , 3 ml de suero en el tubo
3.Nos enjuagamos la boca con agua y rascamos ambos lados internos de la misma con un palillo
4.Introducimos el palillo en el tubo de ensayo y lo mezclamos unos 2 minutos aproximados
5.Extraemos de ahí 1.4 ul y lo introducimos en un eppendof
6.Lo centrifugamos a 8000 rpm durante 5 minutos
7.Retiramos el sobrenadante
8.Añadimos en el eppendor 70 ul de matriz instangene , e incubamos en una maquina de baño seco durante 10  minutos a  100 grados centigrados
9.Dejamos enfriar y centrifugamos a 13.000 rpm durante 30 minutos
10.Por ultimo extraemos 10 ul del tubo de eppendof  y lo depositamos en otro tubo nuevo
11.Lo congelamos

SEGUNDA PARTE

MATERIAL:

Vaso de precipitado

Bata

Guantes

Micropipeta de 2 ul , 18.5 ul y 2.5 ul

Puntas de micropipeta

Centrifuga

Termociclador

Tubo de ready to go

Gradilla de corcho

Rotulador de vidrio

REACTIVOS:

• Oligo 1   2 ul
• oligo 2  2 ul
• Agua destilada 18.5 ul

MUESTRA:

2.5 ul de eppendor preparada en la primera parte

DESARROLLO:

1.Preparamos el agua destilada en un vaso de precipitado

2.Cogemos una gradilla de corcho y colocamos el eppendof de nuestro ADN y el tubo ready to go

3.Extraemos 2.5 ul de nuestro ADN y lo depositamos en un ready to go y añadimos al mismo 2 ul de aligo 1 y 2 ul de oligo 2 y finalmente 18.5 ul de agua destilada

4.Mezclamos suavemente

5.Centrifugamos un golpe

6.Colocamos el tubo ready to go en el termociclador , cerramos la tapa y ya comienza los 30 ciclos

7.Lo retiramos y se guarda en frigorífico

TERCERA PARTE

MATERIAL:

Balanza

Pipeta de 10 ml

Vaso de precipitado

Rotulador de vidrio

Microondas

Matraz

Probeta de 100 ml

Micropipeta de 1.5 ul

Puntas desechables

Bata

Guantes

Vidrio de reloj

REACTICOS:

• Agua destilada
• Tampon TAE 10 ml
• AGarosa 1.5 gr
• Red safe nucleic acid staining solution

DESARROLLO:

1.Pesamos 1.5 g de agarosa en la balanza y la depositamos en una probeta de 100 ml

2.Añadimos 10 ml de tampón en la probeta de 100 ml y  depositamos la disolución de agarosa

3.A continuación ,enrasamos hasta 100 ml de agua destilada

4.Lo depositamos la mezcla en un matraz Erlenmeyer

5.Calentamos en microondas unos segundos

6.Lo sacamos y lo movemos un poco  y lo volvemos a calentar , hasta ver que esta totalmente diluida la mezcla

7.Dejamos enfriar unos minutos

8.Añadimos 1.5 ul de red safe nucleic acid staining solution y  ya tenemos lista la agarosa para realizar la electoforesis que seria el ultimo proceso

CUARTO PROCESO

MATERIAL:

Balanza

Vidrio de reloj

Prepipeta

Pipeta de vidrio de 2 ml

Probeta de 10 ml

Cubeta especial

Cinta adhesiva

Fuente de alimentación

Eppendof

Micropipeta de 10 ul y 5 ul

Puntas desechables

Bata

Guantes

Papel de fieltro

REACTIVOS:

• Ladder
• Agarosa
• Tampon de carga(glicero 30% , azul de metileno y agua destilada)
• Tampon TAE

MUESTRA:

Primer eppendof:9 ul de ADN replicado + i ul de tampón de carga

Segundo eppendof: 4.5 ul de ladder + 0.5 ul de tampón de carga

DESAROLLO:

1.Colocamos cinta adhesiva en la cubeta donde se va a depositar agarosa

2.Depositamos agarosa lentamente para que no se produzcan burbujas y lo dejamos actuar unos 30 minutos aproximadamente

3.Retiramos las dos peines y lo colocamos en la bandeja de fuente de alimentación .

4.Los palillos deben estar en cátodo , y la muestra debe moverse hacia el ánodo

5.Añadimos el tampón TAE

6.Añadimos control en las esquinas

7.A continuación ,depositamos en pocillos la muestra , 9 ul de DNA + 1 ul de tampón de carga.

8.Una vez llenados los palillos conectamos los cables en la fuente de alimentación y aplicamos una corriente de 120 voltios durante 30 minutos

9.Visualizamos los fragmentos de ADN  en luz ultravioleta

PRACTICA:PRUEBA CRUZADA MAYOR

MATERIAL:
Tubo de hemolisis
Papel de fieltro
Gradilla
Bata
Guantes
Centrifuga
Baño María
Pipeta pasteur
Cronometro
REACTIVOS:

• Solución salina fisiológica
• Suero antiglobulina de coombs
• Albumina bovina al 30 %

MUESTRA:
Hematies tipados al 5%
Suero del receptor
FUNDAMENTO:
Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes del donante , primero en medio salino ,posteriormente en medio albuminoso y por ultimo frente al suero antiglobulina de coombs.Con este ultimo paso detectaremos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria
DESARROLLO:
1.Depositamos 1 gota de supension de hematíes al 5% y 2 gotas del suero receptor
2.Mezclamos suavemente , lo dejamos reposar de 2 a 3 minutos a temperatura ambiente
3.Centrifugamos a 3500 rpm durante 30 segundos (1700 a 1 minuto ) porque la centrifuga no tiene segundos
4.Leemos el resultado en medio salino
En el caso de no presenta aglutinación se sigue haciendo pruebas:
5.Añadimos 3 gotas de albumina bovina al 30 %
6.Meclamos suavemente e incubamos en el baño maria a 37 grados durante 30 minutos
7.Centrifugamos a 3500 rpm durante 30 segundos (1700 durante 1 minuto)
8.Leemos los resultados en medio albuminoso
En el caso de dar la prueba negativa se sigue haciendo otro proceso:
9.Lavamos los hematíes con solución salina 3 veces
10.Añadimos 1 gota de suero coombs y centrifugamos a 1000 rpm durante 2 minutos
11.Leemos los resultados
RESULTADOS
LECTURA DE LOS RESULTADOS:
Consiste en resuspender el botón hemático con suavidad después de cada una de las centrifugaciones
INTERPRETACION CLINICA DE LOS RESULTADOS:

• La ausencia de aglutinación en todos los pasos indica que las sangres son compatibles , la transfusión es posible
• La aglutinación en cualquiera de las fases de la prueba indica incompatibilidad
• Si se observa hemolisis en cualquiera de los pasos , también es signo de incompatibilidad

HOJA DE TRABAJO:
1.¿Que se enfrenta en la prueba cruzada mayor?
Consiste en enfrentar suero del receptor con los hematíes del donante
2.¿Cuando se debe realizar la prueba cruzada mayor?
Cuando se transfunde una gran cantidad de plasma
3.¿Por que debemos realizar la prueba en medio albuminoso y salino?
Para detectar todos los anticuerpos presentes
4.¿Que pone de manifiesto el suero antiglobulina de coombs?
Detectamos los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria
RESULTADOS OBTENIDOS:

	RESULTADOS
MEDIO SALINO	-
MEDIO ALBUMINOSO	-
SUERO ANTIGLOBULINA	-

 

VALORACION DE LOS RESULTADOS:
Existe una ausencia de aglutinación , por lo tanto las sangres son compatibles y se puede realizar la transfusión.
Sangre A2 con plasma B son incompatibles
Sangre B con  plasma A1 y A2 son incompatibles
OBSERVACIONES:
Como la centrifuga no puede poner segundos , hemos tenido que calcular el tiempo que pondríamos para que los resultados no salgan defectuosos  , lo cual seria 1700 rpm durante 1 minuto

PRACTICA:DETERMINACION RAPIDA DE HB

MATERIAL:
Vaso de precipitado
Lanceta
Algodón
Capilar
Bata
Guantes
Papel de fieltro
REACTIVO:
Sulfato de cobre
La preparación seria:

• Disolvemos 17 gramos de sulfato de cobre en un matraz con 100 ml de agua destilada
• Añadimos 0.74 ml  mas de agua destilada con una pipeta de 2 ml
• Cogemos un matraz de 50 ml y lo enrasamos con la solución madre y añadimos 1 ml mas de agua
• Añadimos la preparación del paso anterior en un vaso de precipitado de 100 ml y enrasamos con agua destilada

MUESTRA:
Sangre capilar
FUNDAMENTO:
ES una determinación rápida de hemoglobina se basa en el hecho de que una sangre con una concentración de Hb superior a la permitida ,para poder efectuar una donación, tiene una densidad mayor a la de la solución de sulfato de cobre previamente preparada.

• Para los donantes varones se debe preparar una solución de sulfato de cobre de densidad igual a 1.054g/cm3,ya que a través de esta solución cae libremente una gota de sangre con Hb a una concentración superior a 13g/dl
• Para las mujeres donantes se debe preparar una solución de sulfato de cobre de densidades igual a 1.052g/cm3 ,ya que a través de esta solución cae libremente una gota de sangre con Hb a una concentración superior a 12g/dl

DESARROLLO:
1.Añadimos el sulfato de cobre que hemos preparado en un vaso de precipitado
2.Nos desinfectamos el dedo con alcohol
3.Nos pinchamos con una lanceta y depositamos la sangre en un capilar o directamente en el vaso de precipitado
4.Dejamos actuar durante 15 segundos , para ver si cae la gota al fondo o queda flotando
5.Leemos los resultados



RESULTADOS:
LECTURA DE LOS RESULTADOS:

Si la gota cae al fondo quiere decir que esta sano , es decir , que no tiene anemia

Si la gota se queda flotando quiere decir que tiene anemia y no puede donar 

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:

• Una gota de sangre con mas de 12 g/dl de Hb tiene una densidad mayor que 1.052g/cm3
• Si una gota cae libremente , tiene una densidad mayor que 1.052 g/cm3 y por tanto tiene una concentración de Hb superior a 12g/dl
• Si la sangre problema tiene una concentración de Hb superior a 12g/dl ,el sujeto puede donar
• En el caso contrario ,la donación no puede ser efectuada

HOJA DE TRABAJO:
1.¿Cual es el valor mínimo de hemoglobina que debe tener una mujer antes de la donación?
12.5g/dl
2.¿Con que otra solución comparamos la densidad de la sangre?
Con la de sulfato de cobre
RESULTADOS OBTENIDOS:
El donante es apto:
Si

PRACTICA PREPARACION DE SUSPENSIÓN DE HEMATÍES TIPADOS 24/04/2015

MATERIAL:

Pipeta pasteur

Micropipeta 

Puntas de micropipeta

Centrifuga

Tubos de centrifuga

Papel de fieltro

Para film

Vaso de precipitado

Vaso para residuos

Suero fisiologico

Sangre

Gradilla
Guantes esteriles

REACTIVOS:

• Suero salino

MUESTRA:

Sangre A1;B;A2;0

DESARROLLO:

1.Cogemos un 1 ml de sangre con una micropipeta y echamos una cantidad de suero salino

2.Centrifugamos los tubos a 2.000 rpm durante 4 minutos

3.Retiramos el sobrenadante

4.Repetimos dos veces mas el proceso anterior

5.Añadimos en otros 4 tubos dos gotas de sangre de cada grupo y 5 ml de suero fisiológico

6.Lo guardamos en el frigorifico

PRACTICA:DETERMINACION DE UN Du

MATERIAL:

Centrifuga

Tubos de centrifuga

Pipeta pasteur

Gradilla

Vaso de precipitado para residuos

Baño maría

Reloj

Papel de fieltro
Bata
Guantes

REACTIVOS:

• Suero anti-D humano
• Suero antiglobulina humana al conejo
• Solución salina fisiológica

MUESTRA:

Hematíes 

FUNDAMENTO:

El D es un antígeno débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación de Rh .Por ello debemos sensibilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D,y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs.Si existe el antígeno D en la superficie de los eritrocitos ,se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana y en la segunda fase darán lugar a la aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana

DESARROLLO:

1.Lavamos tres veces los hematíes con solución salina fisiológica

2.Tomamos 0.5 ml de sangre problema y la llenamos a un tubo de centrifuga

3.Completamos el tubo con solución salina y agitamos suavemente

4.Centrifugamos durante 4 minutos a 2.000 rpm 

5.Retiramos el sobrenadante y repetimos dos veces mas el proceso
6.Colocamos una gota  de suero anti-D y una gota de la suspensión de hematíes al 5%
7.Mezclamos suavemente 
8. Incubamos a 37 grados durante 30-45 minutos
9.Echamos solución salina en el tubo y centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto (2 veces )
10.Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs y lo mezclamos suavemente
11.Centrifugamos durante 1 minuto a 1000 rpm 
12.Golpeamos suavemente los tubos


EN CASO DE DAR EL RESULTADO NEGATIVO SE HACE OTRA APARTE DE LA TÉCNICA 1
1.Cogemos una gota de los hematíes lavados y los añadimos en un tubo 
2.Echamos suero fisiológico y centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto (2 o 3 veces)
3.Resuspendemos el sedimento
4.Añadimos suero antiglobulina , y centrifugamos a 3500 rpm durante 30 segundos
5.Por ultimo leemos los resultados

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS
Lo observamos con la lámpara de luz

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

• Existe aglutinación, cuando el resultado es positivo: Indica que en la membrana de los hematíes hay antígeno D y se clasifica la sangre como Rh positivo variante D
• No existe aglutinación cuando se clasificara la sangre como un Rh negativo

HOJA DE TRABAJO:
1.¿Que contiene el suero de Coombs?
Suero antiglobulina humana
2.¿Que se detecta con la prueba directa?
Se detecta el antígeno D
3.¿Que podemos detectar con la prueba indirecta?
La presencia del antígeno en la membrana del hematie
4.¿Que buscamos en la sangre del paciente?
Aglutinación en presencia del suero
5.¿Que ocurre si el control es positivo?
Indica que en la membrana de los hematíes hay antígeno D

RESULTADOS OBTENIDOS:

	Aglutinación
Sección S  -
Sección A   -

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:
La sangre es:No presenta aglutinación , por lo que seria Rh negativo

PRACTICA:DETERMINACION DEL FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA Rh

MATERIAL:

Centrifuga
Rotulador
Vaso de precipitado para residuos
Tubos de centrifuga
Pipeta pasteur
Papel de fieltro
Bata
Guantes
REACTIVOS:

• Suero anti-D
• Suero anti-E
• Suero anti-C
• Suero anti-e
• Suero anti-c
• Solución salina fisiológica

MUESTRA:
Suspensión de hematíes lavados al 5% de solución salina fisiológica
FUNDAMENTO:
Podemos investigar el genotipo del sistema Rh enfrentando los hematíes problema a distintos antisueros dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh
La existencia o no de estos antígenos en la superficie de los hematíes se detecta por una reacción de aglutinación.Los resultados de estas reacciones se trasladan a una tabla donde podemos ver los posibles genotipos correspondientes
DESARROLLO:

1.Lavamos tres veces los hematíes con solución salina fisiológica

2.Tomamos 0.5 ml de sangre problema y la llenamos a un tubo de centrifuga

3.Completamos el tubo con solución salina y agitamos suavemente

4.Centrifugamos durante 4 minutos a 2.000 rpm 

5.Retiramos el sobrenadante y repetimos dos veces mas el proceso
6.Rotulamos los 5 tubos de centrifuga , cada uno con la letra D,C,E,c y e
7.Añadimos una gota de antisuero y una gota de suspensión de hematíes al 5%
8.Movemos suavemente
9.Centrifugamos durante 1 minuto a 1000 rpm
10.Golpeamos suavemente los tubos 

RESULTADO:
LECTURA DE LOS RESULTADOS

• El resultado es positivo:Es la presencia de aglutinacion y se observa con la presencia de grumos rojos sobre un  claro
• La ausencia de aglutinacion es un resultado negativo:Se observa como la suspension homogenea de los hematies en un liquido rojizo

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
Un resultado positivo indica la presencia del antígeno del sistema Rh buscando en ese tubo.
Los cinco resultados obtenidos expresan el fenotipo de la sangre analizada y se comparan con los contenidos en la tabla de fenotipos y genotipos del sistema Rh que se encuentran


La sangre analizada es Rh negativo, se puede determinar su único genotipo posible con respecto al sistema Rh. Sin embargo , si la sangre es Rh positiva ,existen varios genotipos posibles que dan lugar al fenotipo previamente detectado
HOJA DE TRABAJO:
1.¿Que antisueros se utilizan en esta técnica?

• Suero anti-D
• Suero anti-E
• Suero anti-C
• Suero anti-e
• Suero anti-c

2.¿Por que no existe suero anti-D?
Por que el antígeno & es nulo 3.¿Que expresan los cinco resultados obtenidos?
Fenotipo
4.Si la sangre es Rh +¿puede determinarse exactamente su genotipo con respecto al sistema Rh?
Existen varios genotipos posibles
5.Si los resultados obtenidos son :D-,D-,E+,c+,e-¿Cuales es el genotipo posible de esta sangre?
dcE/dcE

RESULTADOS OBTENIDOS:

Tubo	Aglutinación
D	-
C	+
E	+
C	+
e	+

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:
El genotipo posible del sistema Rh en la sangre analizada es:dCe/dcE y dCE/dce