PRACTICA:DETERMINACION DE UN Du

MATERIAL:

Centrifuga

Tubos de centrifuga

Pipeta pasteur

Gradilla

Vaso de precipitado para residuos

Baño maría

Reloj

Papel de fieltro
Bata
Guantes

REACTIVOS:

• Suero anti-D humano
• Suero antiglobulina humana al conejo
• Solución salina fisiológica

MUESTRA:

Hematíes 

FUNDAMENTO:

El D es un antígeno débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación de Rh .Por ello debemos sensibilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D,y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs.Si existe el antígeno D en la superficie de los eritrocitos ,se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana y en la segunda fase darán lugar a la aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana

DESARROLLO:

1.Lavamos tres veces los hematíes con solución salina fisiológica

2.Tomamos 0.5 ml de sangre problema y la llenamos a un tubo de centrifuga

3.Completamos el tubo con solución salina y agitamos suavemente

4.Centrifugamos durante 4 minutos a 2.000 rpm 

5.Retiramos el sobrenadante y repetimos dos veces mas el proceso
6.Colocamos una gota  de suero anti-D y una gota de la suspensión de hematíes al 5%
7.Mezclamos suavemente 
8. Incubamos a 37 grados durante 30-45 minutos
9.Echamos solución salina en el tubo y centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto (2 veces )
10.Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs y lo mezclamos suavemente
11.Centrifugamos durante 1 minuto a 1000 rpm 
12.Golpeamos suavemente los tubos


EN CASO DE DAR EL RESULTADO NEGATIVO SE HACE OTRA APARTE DE LA TÉCNICA 1
1.Cogemos una gota de los hematíes lavados y los añadimos en un tubo 
2.Echamos suero fisiológico y centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto (2 o 3 veces)
3.Resuspendemos el sedimento
4.Añadimos suero antiglobulina , y centrifugamos a 3500 rpm durante 30 segundos
5.Por ultimo leemos los resultados

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS
Lo observamos con la lámpara de luz

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

• Existe aglutinación, cuando el resultado es positivo: Indica que en la membrana de los hematíes hay antígeno D y se clasifica la sangre como Rh positivo variante D
• No existe aglutinación cuando se clasificara la sangre como un Rh negativo

HOJA DE TRABAJO:
1.¿Que contiene el suero de Coombs?
Suero antiglobulina humana
2.¿Que se detecta con la prueba directa?
Se detecta el antígeno D
3.¿Que podemos detectar con la prueba indirecta?
La presencia del antígeno en la membrana del hematie
4.¿Que buscamos en la sangre del paciente?
Aglutinación en presencia del suero
5.¿Que ocurre si el control es positivo?
Indica que en la membrana de los hematíes hay antígeno D

RESULTADOS OBTENIDOS:

	Aglutinación
Sección S  -
Sección A   -

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:
La sangre es:No presenta aglutinación , por lo que seria Rh negativo