PRACTICA: DETERMINACION CELULAR EN TUBO 23/04/2015

MATERIAL:

Tubo de centrifuga

Rotulador

Papel de fieltro

Pipeta pasteur

Centrifuga

Gradilla
Micropipeta 
Puntas de micropipeta
Vaso de precipitado
Vaso para residuos
Bata
Guantes

REACTIVOS:

• Suero anti-A
• Suero anti-B
• Suero anti-AB
• Solución salina fisiológica

MUESTRA:

Sangre total anticoagulada A1,A2,B,0

FUNDAMENTO:

Los hematíes problema contienen las sustancias antigenicas del sistema ABO y se enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos

El resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes reaccionantes

DESARROLLO:

1.Añadimos 1 ml de sangre en tubo de centrifuga y completamos el tubo con solución salina y agitamos para resuspender los hematíes

2.Centrifugamos  durante 4 minutos a 2.000 rpm y quitamos el sobrenadante

3.Rotulamos tres tubos de ensayo A; B ; AB

4.Añadimos dos gotas de sangre precipitada y 5 ml de suero salino 

5.Añadimos 1 gota de la mezcla anterior y 2 gotas del reactivo correspondiente al grupo sanguíneo 

9.Centrifugamos los tubos durante 1 minuto a 1.000 rpm 

10.Observamos la presencia de aglutinación en una luz, y tenemos que ir moviendolo 

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

• Reacción negativa:Los hematíes se resuspenden homogéneamente
• Reacción positiva:Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

Pueden darse falsos positivos :

• Aglutinación no especifica:Se debe a la ácido hialuronico en la sangre ,procedente de la gelatina de Wharton del cordón umbilical y se elimina añadiendo una gota de hialuronidasa a la suspensión de hematíes
• Fenómeno de Rouleaux:Consiste en una agrupación no especifica de hematíes,que adoptan una imagen de pilas de monedas.Las sustancias que mas frecuentemente originan este fenómeno son :el frinogeno, las gammaglobulinas , el dextrano y la polivinilpirrolidona

Estos fenómenos pueden evitarse con el lavado previo de los hematíes problema

HOJA DE TRABAJO:
1.¿Que tipo de técnica inmunologica se emplea en este análisis?
La aglutinacion 2.¿A que concentración se preparala suspensión de hematíes problema?
A 2% y el 4 %
3.¿Como se ve una aglutinación positiva?
Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendiendo el sedimento
4.¿A que se debe el fenómeno de Rouleaux?
A la agrupación no especifica de hematíes , que adoptan una imagen de pilas de monedas
5.¿Como se pueden evitar los falsos positivos?
Pueden evitarse con el lavado previo de los hematíes problema

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:
La sangre ensayada es del grupo eritrocitario:
Tubo B: Negativo
Tubo A: Positivo
Tubo AB:positivo