PRACTICA:ESTUDIO DE LA FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS HEMATIES 27/02/2015

FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS HEMATÍES

MATERIALES:

Espectrofotometro

Cubetas de espectrofotometro

Gadilla

Pipeta pasteur

Tubo de centrifuga

Reloj

Centrifuga

Sangre

REACTIVOS

Suero fisiológico 

Agua destilada

MUESTRA:

Sangre venosa anticoagulada

FUNDAMENTO:

Valora la resistencia de los eritrocitos a soluciones de presión osmótica decreciente en condiciones constantes de pH y de temperatura .Para ello , se enfrentan los hematíes problema a soluciones tamponadas de cloruro sódico cuya concentración es decreciente a partir de 9 gramos por mil
Cuando los eritrocitos están en contacto con soluciones hipotomicas, penetra agua a traves de su menbrana y se hinchan.Al hincharse los hematíes, una parte de la Hb que contienen pueden salir al exterior a través de los poros de su menbrana .Si la entrada de liquido es excesiva , los hematíes se rompen y dejan libre toda la Hb que engloban
En condiciones normales un eritrocitos puede aceptar sin hemolizarse una entrada de agua que incremente su volumen en un 70% como máximo

DESARROLLO:

1.Añadimos en cada tubo una gota de sangre (sin tocar las paredes del tubo)

2.Añadimos en cada tubo la cantidad que se corresponde
3.En el tubo 1 añadimos :0 gotas de agua destilada, 18 gotas de suero fisiológico
4.En el tubo 2 añadimos:1 gota de agua destilada y 17 gotas de suero fisiológico
5.En el tubo 3 añadimos:2 gotas de agua destilada y 16 gotas de suero fisiológico
6.En el tubo 4 añadimos:3 gotas de agua destilada y 15 gotas de suero fisiológico
7.En el tubo 15 añadimos:14 gotas de agua destilada y 4 gotas de suero fisiológico
8.En el tubo 16 añadimos:15 gotas de agua destilada y 3 gotas de suero fisiológico
9.En el tubo 17 añadimos:16 gotas de agua destilada y 2 gotas de suero fisiológico
10..En el tubo 18 añadimos:17 gotas de agua destilada y 1 gotas de suero fisiológico

11.Agitamos los tubos suavemente

12.Dejamos en reposo durante 30 minutos 

13.Centrifugamos los tubos a 2000 rpm durante 5 minutos

14.Cogemos el sobrenadante de los tubos obtenidos y lo leemos en el espectrofotometro 

RESULTADOS:

LECTURA DE LOS RESULTADOS:

Hay dos tipos de resultados:

• Visual:No hay hemolisis cuando en el tubo se observa un sedimento en forma de botón rojizo y un liquido sobrenadante incoloro y transparente
• Espetrofotometrica:Se recoge de forma separada el liquido contenido en todos los tubos y se mide la absorbancia de cada uno de ellos , en un espectrofotometro ajustando a una longitud de onda de 540nm.El tubo utilizado es el numero 1 ya que ha sido elaborado a partir de una solución de cloruro de sodio a una concentración de 9g/l.Los resultados obtenidos se miden en % , lo que el numero 18 corresponde al 100% de hemolisis.

% de hemolisis= A/AM*100

% de hemolisis:0.248/1.060*100=23.39%

% de hemolisis:0.464/1.060*100=43.77%

% de hemolisis:0.694/1.060*100=65.47%

% de hemolisis:1.023/1.060*100=96.50%

% de hemolisis: 1.060/1.060*100=100%

% de hemolisis:0.532/1.060*100=50.18%

% de hemolisis:0.984/1.060*100=90.94%

% de hemolisis:1.021/1.060*100=96.32%

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS:

• Cuando la ROE baja:Aumenta la hemolisis en los tubos que contienen solución salina a mayor concentración:

1. Esferocitosis hereditaria
2. Eliptocitosis u Ovalocitosis congénita
3. Estomatocitosis hereditaria

• Cuando la ROE sube:La aparición de la hemolisis se retarda y empieza a nivel de tubos que contienen solución salina a una concentración menor que lo previsto.

1. Talasemia minor
2. Anemia ferropenica

HOJA DE TRABAJO:

1.¿Que concentración de NaCl tiene el suero fisiológico?

9 gramos de cloruro sódico

2.¿En que porcentaje se puede incrementar normalmente el volumen de los hematíes sin que estos se rompan?

70%

3.¿Que sustancia se emplea para anticoagular la sangre en esta prueba?

Heparina

4.En esta prueba¿Cual es la concentración salina menor a la que se preparan las soluciones?

Solución menor 0.2 gramos de fosfato sódico mono-básico(2.5 ,3 ,3.5 g/l)

5.En condiciones normales ¿A que concentración salina suele producirse una hemolisis del 50%?

Concentración del tubo numero 10 y solución salina 4.5 y 4 g/l

6.¿En que enfermedades se produce una disminución de la ROE?

• Esferocitosis hereditaria
• Eliptocitosis u Ovalocitosis congenita
• Estomatocitosis hereditaria 

RESULTADOS OBTENIDOS:

Lectura visual:

• Primer tubo en el que se observa con claridad una hemolisis parcial:Bien
• Concentración de la solución salina contenida en este tubo: 4.5 g/l
• Primer tubo en el que se aprecia una     hemolisis prácticamente total:Tubo numero 10 y 11
• Concentración de la solución salina presente en este tubo: 4.5g/l

Lectura espectrofotometrica:

Tubo        A         % de hemolisis
1         0.248          23.39
2         0.464          43.77
3         0.532          50.18
4         0.694          65.47
15        0.964          90.94
16        1.021          96.32
17        1.022          96.50
18        1.060          100

concentración de la solución salina que da lugar a una hemolisis del 50 %: Tubo numero 10 y 11

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:

• La fragilidad osmótica de los hematíes contenidos en la sangre  estudiada es :Normal
• LA ROE de la sangre analizada es: Normal