PRACTICA :PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA

CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA

MATERIAL:

Tubos de ensayo de plástico

Rotulador

Prepipeta de seguridad

Pipeta graduada de vidrio o micropipeta de 1000 ul

Micropipeta de 100 ul y 200 ul

Puntas de micropipeta

Cubetas de coagulometro

Acero

Coagulometro

REACTIVOS:

• Solución salina al 0.85%
• Tromboplastina cálcica
• Pool de plasma normales

FUNDAMENTO:

Para construir una curva de actividad de la protrombina se prepara una batería de disoluciones, a partir de un plasma control normal y se mide el TP del plasma control normal no diluido y de cada una de las disoluciones preparadas

Tras ello se asigna el 100% de actividad al numero de segundos medidos en la determinación del TP del plasma control normal puro , y se calcula el porcentaje que , proporcionalmente , les corresponde a los valores de TP determinados en cada una de las disoluciones de este.

DESARROLLO:

1. Centrifugamos la sangre de David

2. Sacamos el plasma obtenido y lo mezclamos con el otro plasma de los años pasados

3. Rotulamos los 5 tubos de ensayo (100; 50; 33; 25; 10)

4. Introducimos en los 5 tubos 200 ul de pool de plasmas

5. En el tubo numero 100, añadimos 0 ul de solución salina con una micropipeta

6. En el tubo numero 50, añadimos 200 ul de solución salina con una micropipeta

7. En el tubo numero 33, añadimos 400 ul de solución salina con una micropipeta

8. En el tubo numero 25, añadimos 600 ul  de solución salina con una micropipeta 

9. En el tuno numero 10, añadimos 1800 ul de solución salina con una pipeta de cristal de 2 ml

10. Rotulamos las cubetas y las introducimos en el coagulometro

11. Echamos 100 ul de cada tubo en las cubetas

12. Añadimos en una cubeta reactivo

13. Ponemos el tubo 100 debajo del tapón rojo y añadimos 200 ul y en los demás tubos hacemos el mismo proceso

14. Leemos los resultados con el coagulometro

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

El TP es el tiempo transcurrido desde la adición de la tromboplastina cálcica hasta la formación del coagulo de fibrina

HOJA DE TRABAJO:

1. ¿Con que se diluye el pool de plasma normal o el plasma control normal?

Solucion salina al 0.85%

2. ¿Que porcentaje de actividad se asigna a la dilución del plasma control de 1/2?

50%

3. ¿Cuando se pone en marcha la lectura del coagulometro?

Cuando incorporamos la placa el coagulometro y le añadimos el reactivo

4. ¿Que se anota en el eje de ordenadas?

Se anota el % y el tiempo de protrombina

RESULTADOS OBTENIDOS:

                                    TIEMPO DE PROTROMBINA
Plasma control no diluido            12.3
Plasma control diluido               19
Plasma control diluido a 1/3         25.3
Plasma control diluido a 1/4         32.4
Plasma control diluido a 1/10        61.3