PRACTICA DE HIERRO

HIERRO

MATERIAL:
Espectrofotometro
Cubetas
Rotulador de vidrio
Tubos de plástico
Pipeta graduada de 1 ml
Pipeta automatica de 200 ul
Vaso de precipitado para residuos
Papel de fieltro
REACTIVOS:
R1 Tampon (acetato pH 4.9 100mmol/L)
R2 Reductor(ácido ascorbico 99.7%)
R3 Color (ferroZine 40mmol/L)
IRON CAL(patrón primario acuoso de hierro 100ug/dl)
MUESTRA:
Sangre venosa
FUNDAMENTO:

• El hierro férrico presente en la muestra y unido a la transferrina es liberado por la acción guanidino
• El hierro ferrico libre es reduciod a ferroso por la hidroxilamina
• El hierro ferroso reacciona con la ferrozina para producir un complejo coloreado

DESARROLLO:
Lo primero de todo hacemos el reactivo de trabajo disolviendo el contenido de tubo R2(reductor) en un frasco de R1(Tampon), a continuación los tapamos y lo mezclamos
1.Cogemos cuatro tubos de ensayo
2.Rotulamos los tubos de ensayo (blanco RT , patrón , blanco muestra , muestra)
3.En el tubo blanco RT añadimos :1 ml de reactivo de trabajo , 1 gota de R3 y 200 ml de agua destilada
4.En el tubo patrón añadimos:1 ml de reactivo , 1 gota de R3 y 200 ul de patrón
5.En el tubo blanco muestra añadimos: 1 ml de reactivo , y 200 ul de muestra
6.En el tubo muestra añadimos: 1 ml de reactivo , 1 gota de R3 y 200 ul de muestra
7.Lo dejamos reposar
8.Lo introducimos en el baño maría durante 5 minutos a 37 grados
9.Leemos los resultados con el espectrofotometro
RESULTADO:
LECTURA DE LOS RESULTADOS
Sideremia (en ug/dl)= A muestra - A blanco de la muestra / A del patrón * concentración del patrón
INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
Valores normales:

• Mujeres:55-140 ug/dl
• Hombres :70-155 ug/dl

HOJA DE TRABAJO:
1.¿por que tenemos un tubo BR?
Para calcular la absorbancia del contenido frente a agua destilada
2.¿Que muestras no son validas?
Las lipemicas o hemolizadas
3.¿En que unidades se mide la sideremia?
Se mide en ug/dl
RESULTADOS OBTENIDOS:

• A de la muestra:0.600
• A de la BM:0.400
• A del P:0.253
• Concentración del patrón80

Sideremia (en ug/dl)= A muestra - A blanco de la muestra / A del patrón * concentración del patrón
0.600*0.400/0.253*80= 75.88 ug /dl
valoracion de los resultados :
El sujeto estudiado se encuentra en los valores normales

PRACTICA DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA EN SANGRE 19-1-2015

HEMOGLOBINA

MATERIAL:

Espectofotometro

Cubetas

Pipeta

Micropipeta

4 Tubo de ensayo

Agua destilada

Vaso de precipitado

Papel de filtro

3 tubos de hemolisis

REACTIVOS:

Hemoglobin 50x que esta hecho por: 

1. ferricianuro de potasio 0.60mmol/L
2. Cianuro de potasio 77mmol/L
3. Dihidrogeno fosfato de potasio 2mmol/L

Hemoglobin cal

MUESTRA:

Sangre venosa

FUNDAMENTO:

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferrocianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina

La intensidad de color formado es proporcional  a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada

DESARROLLO:

1. Se hace el reactivo de trabajo añadiendo el bote de R2 al  frasco de R1 , lo agitamos y ponemos el nombre
2. Preparamos el patrón que esta compuesto por tres fases : 1.añadimos en un tubo de ensayo 250 ul(1 patrón y tarro normal)2.Añadimos en otro tubo de ensayo 250 ul y 250 agua destilada(2 patrón 1/2)a continuación vamos mezclando la muestra con una pipeta pasteur 3.Añadimos en un tubo de ensayo 250 ul y 250 ml de agua y lo mezclamos 4.Cogemos otros dos tubos y añadimos en cada uno de ellos diferente sangre (la primera sangre es cojida del frigorífico y es 0+ y la segunda muestra es sangre de valentin 0+)
3. Cogemos tres tubos de ensayo
4. Los rotulamos (blanco , patrón y muestra)
5. En el tubo blanco añadimos:205 ml de reactivo de trabajo 
6. En el tubo patrón añadimos:2.5 ml de reactivo de trabajo y 10 ul de calibrador
7. En el tubo muestra añadimos:2.5 ml de reactivo de trabajo y 10 ul de muestra
8. Lo dejamos reposar durante 3 minutos
9. Leemos los resultados en el espectrofotometro

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

 Hb = A de la muestra /A patron * 7.5

Hb= 0.800/0.500*7.5= 12

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
Los valores normales :

• Hombres:14-18 g/dl
• Mujeres:11-16 g/dl
• Niños:10-14 g/dl

HOJA DE TRABAJO:
1.¿En que se basan los métodos de determinación de la hemoglobina?
Se basan en las propiedades fisicoquimicas de la molécula de hemoglobina
2.¿Cual es el método recomendado por el comité internacional para la estandarizacion de la hematologia?
El método colorimetrico de la cianmetahemoglobina por su exactitud y precisión
3.¿De donde procede el 20 de la formula para calcular la concentración?
Procede de la cianmetahemoglobina

RESULTADOS OBTENIDOS:
Los resultados son de una mujer , esta comprendido en los valores normales

RECUENTO DE PLAQUETAS CON HEMOCITOMETRO 15/1/15

PLAQUETAS

MATERIAL:

Tubo de ensayo

Pipeta diluidora de Thoma

Gasas

Camara de recuento

Cubreobjetos

Microscopio

Placa de petri

Papel de filtro

prepipeta con su goma

REACTIVO:

Liquido del laboratorio spinreact

Agua destilada

MUESTRA:

Sangre venosa

FUNDAMENTO:

Se diluye la sangre con el liquido spinreact para contar las células presentes en algunos de los cuadrados de los reticulocitos

DESARROLLO:
1.Vertemos un 1 ml de liquido de spinreact en un tubo de ensayo
2.Cogemos un 1 ml de sangre con la pipeta de Thoma 
3. Cuando sacamos la pipeta del tubo de ensayo la limpiamos con una gasa

4.Introducimos la pipeta diluidora en el tubo de ensayo del liquido y cogemos hasta 101 ml 
5.Agitamos la pipeta durante 5 minutos,en posición horizontal
6.Desechamos las 5 primeras gotas
7.Cargar la camara de recuento , en una placa de petri en cuyo interior se deposita un trozo de papel de fieltro mojado de agua y lo tapamos con la tapadera
8.Dejamos reposar unos 15 minutos
9.La visualizamos en el microscopio, primero con el objetivo de 10x y despues con el de 40x
10.Por ultimo contamos en numero de plaquetas presentes en un cuadro grande central 

RESULTADOS:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Las plaquetas son corpúsculos redondeados u ovalados de tamaño muy pequeño y muy refrigerantes

• Muy reducida,se efectúa una dilucion menor de la muestra
• Muy elevada,se efectúa una dilucion mayor de la muestra

PLT/MM3=P*V*D*1000

PLT=10*740*100*1000=740.000.000plt/mm3

HOJA DE TRABAJO:

1.¿Que tipo de pipeta diluidora se utiliza en el recuento de plaquetas?

La pipeta de Thoma

2.¿Que funciones desempeña el liquido de dilucion empleado?

• Rompe los hematíes 
• Evita la agregación de las plaquetas entre si 
• Facilita la visualización de las plaquetas al hacerlas refrigerentes

3.¿Cuanto liquido de dilucion se necesita para efectuar un ensayo?

1 ml aproximadamente

4.¿Con que se puede preparar una camara humeda?

Con una placa de petri cerrada, en cuyo interior se deposita un papel de fieltro con agua

5.¿Con que objetivo se cuentan las plaquetas?

40x

6.¿Como se aprecian los trombocitos en este recuento?

Se aprecian como corpúsculos redondeados u ovalados , de tamaño muy pequeño y muy refrigerentes

RESULTADOS OBTENIDOS:

• Numero de plaquetas contadas en un cuadrado grande: 740
• Numero de plaquetas por mm3 de sangre: 740.000.000plt/mm3

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:

El numero de plaquetas obtenido es:

Alto
OBSERVACIONES:
También se puede hacer esta practica con micropipeta :
la proporción seria :1/100(1 de sangre y 100 de liquido)

• Cogemos 0.005 ml de sangre (que es 5 ul ),se coge con una micropipeta de 5 ul
• Cogemos 0.495 ml de liquido(que es 495 ul), se coge con una micropipeta de 500 ul

RECUENTO DE PLAQUETAS EN FROTIS SANGUINEOS 9/01/2015

PLAQUETAS

Material:

Papel

Boligrafo

Gradilla

Capilar

Lanceta

Algodón

Alcohol

Papel de filtro

Microscopio

Portaobjetos

Reactivo:

Panoptico rapido

Muestra:

Sangre anticoagulada

Desarrollo:

1.Con una gasa y alcohol nos desinfectamos el dedo , con ayuda de una lanceta nos pinchamos en el dedo central y la primera gota se tira.Con un capilar cogemos la sangre que nos sale del dedo

2.Depositamos tres gotas de sangre y hacemos un frontis sanguíneo

3.Teñimos la muestra con panóptico rápido y lo enjuagamos con agua destilada

4.Lo dejamos secar en posición vertical o si tarda mucho en seca podemos usar el menchero bunser , añadimos una gota de aceite de inmersión

5.Observamos con el microscopio de 100x 

6.Contamos el numero de plaquetas presentes en 10 campos microscópicos

Resultados

Lectura de los resultados:

PLT/MM3=PLT/C*20000

• plt/mm3(numero de plaquetas por mm3 de sangre)
• plt/c(media del numero de plaquetas contadas en varios campos microscópico)

1. 50
2. 60
3. 50
4. 40
5. 36
6. 35
7. 25
8. 40
9. 32
10. 40

SANGRE DAVID

1. 
   SANGRE ESTEFANIA
   
   
   
   
   
   
   
   SANGRE MIA
   
   
   
   
   
   
   

Interpretación clínica de los resultados obtenidos:

Tiene trombocitosis

Hoja de trabajo:

1.En condiciones normales,¿cuantas plaquetas por campo microscópico hay en zona de un frontis sanguíneo donde los eritrocitos no están superpuestos?

De 5 a 25 trombocitos por campo

Resultados obtenidos:

• Numero de plaquetas contadas en 10 campos microscopicamente 408
• Media del numero de plaquetas contadas en 10 campos microscopicos 40,8
• Numero de plaquetas por mm3 de sangre 816.000 plaquetas /mm3

Valoración de los resultados:

El plt/mm3 obtenido implica que el sujeto tiene:

Trombocitosis

RECUENTO DE LEUCOCITOS (WBC) 12/1/15

LEUCOCITOS

MATERIAL:

Pipeta diluidora de thoma (para ver los glóbulos rojos, por lo cual necesitamos la que lleva la bola roja)

Tubo de goma con la boquilla 

Cubreobjetos

Camara de recuento

Microscopio

Para film

Papel

Bolígrafo

REACTIVOS:

Liquido de Turck , que se prepara de la siguiente manera:

• 2 ml de ácido acético glacial(Produce lisis de los eritrocitos sin alterar a los leucocitos)
• 1 ml de violeta de genciana al 1%(Tiene núcleo de los leucocitos para observarse mejor y se puede sustituir por azul de metileno)
• 100 ml de agua destilada

MUESTRA:

Sangre venosa

FUNDAMENTO:

Consiste en la determinación del numero de leucocitos presentes en un volumen determinado de sangre.

DESARROLLO:

1. Del frigorífico sacamos la sangre venosa que esta colocada en una bandeja.

2. Movemos la sangre para arriba y para abajo con cuidado, para que no se junten todas las proteínas y no solo salga leucocitos.

3. Quitamos la pinza que tiene la parte superior de la bolsa.

4. Introducimos la goma de la bolsa de sangre dentro del tubo de ensayo.

5. La bolsa de sangre hay que subirla un poco mas arriba que el tubo de ensayo, cuando ya se vea que esta el volumen que se desea, volvemos a bajar la bolsa de sangre.

6. Antes de sacar el tubo de la sangre, cogemos un papel y lo sacamos con cuidado para no manchar la mesa y lo limpiamos.

7. Volvemos a ponerle la pinza, y meterlo en el frigorífico.

8. Depositamos el tubo de ensayo encima de la mesa de trabajo dentro de la gradilla.
9. Incorporamos la pipeta de Thoma dentro del tubo de ensayo, en donde esta la sangre y vamos cogiendo poco a poco 1 ml de sangre con la ayuda de una prepipeta y una goma de plástico
10. Cuando sacamos la pipeta diluidora del tubo de ensayo lo limpiamos  la punta con una gasa
11. Incorporamos la pipeta en el tubo de ensayo del liquido de hayen y cogemos hasta completar la pipeta ,(101ml)
12.Volvemos hacer el mismo paso anterior, limpiamos la punta de la pipeta
13.Ponemos el dedo abajo,para que no salga el liquido y arriba tenemos que quitar la prepipeta y poner otro dedo para moverlo de 2 a 3 minutos en sentido horizontal
14.Quitamos  el dedo de abajo y desechamos las tres primeras gotas 
15.Mojamos con agua las lineas que lleva la cámara de recuento
16.Ponemos un cubreobjetos en la cámara de recuento(en medio)
17.Depositamos la pipeta diluidora en el extremo del cubre y cuando entre una gota quitamos la pipeta , hacemos en el otro sentido la misma operación
18.Dejamos reposar unos segundo al aire libre
19.Lo visualizamos microscopicamente con el objetivo de 40x(enfocamos el retículo y contamos los leucocitos presentes en los cuadros de las esquinas superiores e inferiores)

RESULTADOS:

LECTURA DE LOS RESULTADOS:
Los azules son los del lado izquierdo y los rosas los del lado derecho

2	5	2	2
1	1	5	2
2	2	7	2
1	9	6	4

2	5	2	2
4	5	3	5
4	3	2	3
4	4	3	3

                                                                                                                                                                   

6	3	2	3
3	1	3	4
6	5	7	1
1	6	4	3

                                                                                                          

4	0	5	1
1	4	3	4
3	1	4	5
6	2	5	3

WBC=L/4*D*10

WBC= 216/4*10*10=5.400leucocitos/mm3 de sangre

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS:

• El indice normal de WBC seria entre 5000 y 11000 leucocitos/mm3 de sangre
• La disminución del WBC se produce en las leucopenias
• El aumento se da en las leucocitosis

HOJA DE TRABAJO:
1.¿Cual es el liquido de dilucion utilizado en el WBC?
El Turck
2.¿Para que sirve el violeta de genciana que contiene el liquido de dilucion?
Para teñir los núcleos de los leucocitos
3.¿Con que objetivo se pueden contar los leucocitos?
Con el de 10x o 40x
4.Si la sangre se diluye a 1/10 y se cuentan 100 leucocitos en 2 cuadrados grandes periferico¿Cual es el WBC obtenido?
WBC=L/4*10*D
WBC=100/4*10*20= 5000LEUCOCITOS/MM3 DE SANGRE

RESULTADOS OBTENIDOS:
Leucocitos contados en los 4 cuadrados grandes periféricos : 216
Factor de dilucion: 10
WBC: 5400

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:
El WBC obtenido es:
Normal
OBSERVACIONES:
Se puede hacer de otra manera diferente a la explica arriba, la cual consiste en :

Con una micropipeta :

• Cogemos 0.05 ml de sangre (que es 50 ul) , lo cual tenemos que cojer 50 ul con una micropipeta de 50 ul
• Cogemos 0.45 ml de liquido ( que es 450 ul), lo cual tenemos que cojer 450 ul de liquido con una micropipeta de 500 ul

DETERMINACION DEL INDICE DE LOBULARIDAD(IL) 9/1/15

LOBULARIDAD

MATERIAL:

Microscopio

Bolígrafo

Papel

Para film

Porta

REACTIVO:

Panóptico rápido

MUESTRA:

Sangre venosa anticoagulada

DESARROLLO:

1.Con una gasa y alcohol nos desinfectamos el dedo , con ayuda de una lanceta nos pinchamos en el dedo central y la primera gota se tira.Con un capilar cogemos la sangre.

2.Depositamos tres gotas de sangre y hacemos un frontis sanguíneo

3.Teñimos la muestra con panóptico rápido y lo enjuagamos con agua destilada

4.Lo dejamos secar en posición vertical o si tarda mucho en seca podemos usar el menchero bunser , añadimos una gota de aceite de inmersión

5.Observamos con el microscopio de 100x 

6.Contamos el numero de determinación del indice de lobularidad presentes en  5 campos microscópicos

RESULTADOS:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

IL=NL/NN

IL=70/100=0.7

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

Puede haber dos tipos de desviación:

1. Desviación a la derecha
2. Desviación a la izquierda

En este caso no ha parecido ningún tipo de desviación , ya que se encuentran en los valores normale

HOJA DE TRABAJO:

1.¿Cuantos tipos de neutrofilos hay según Arneth?

5 tipos

2.¿Que tipo de desviación hay si el IL es igual a 2.5?

Esta normal,no presenta desviación ni a la izquierda ni a la derecha

3.¿De que enfermedades es típica la desviación a la izquierda con neutrofilia?

Infecciones agudas

RESULTADOS OBTENIDOS:

Tipo de neutrofilos             numero de neutrofilos que pertenecen                                 a ese tipo
I                               8
II                              8*2=16
III                             36*3=108
IV                              16*4=64
V                               2*5=10
                   TOTAL:70 

IL=NL/NN

 IL= 198/70 =2.82

• Numero total de lobulaciones cuantificadas: 198 lobulos
• Indice de lobularidad: 0.7

valoración de los resultados:

En la sangre estudiada :

No tiene ningún tipo de desviación , el IL  normal esta comprendido entre 1.9 y 3

ESTUDIO DE UN CONCENTRADO DE LEUCOCITOS 8/01/2015

CONCENTRADO DE LEUCOCITOS

Material:

2 portaobjetos

Tubo de centrifuga

Centrifugadora

Muestra:

Sangre venosa anticoagulada

Reactivo:

panóptico rápido

Fundamento:

Cuando se centrifuga la sangre anticoagulada se separa en tres capas:

1.  En la inferior están los eritrocitos que son de color rojo
2. En la capa media están las plaquetas y los leucocitos   en donde  se encuentra el buffy coat o placa leucoplaquetaria y son de color blanco
3. En la superior se encuentra el plasma , que es de color ambarino o transparente

Desarrollo:

1.Centrifugamos la sangre a 1500 rpm durante 15 minutos

2.Con una micropipeta sacamos el plasma

3.Cogemos con una micropipeta unas gotas de la capa leucoplaquetaria

4.Hacemos un frontis sanguíneo

5.Teñimos la extensión sanguínea durante 1 segundo 5 veces en la misma solución(panóptico rápido), lo enjuagamos con agua y lo dejamos secar unos segundos en posición vertical

6.Observamos con el microscopio

Resultados:

lectura de los resultados
Los resultados que hemos obtenido son las siguentes imagenes, como se aprecia hay tres tipos de leucocitos .

Hoja de trabajo:

1.¿Como se llama a la condensación del material genético inactivado de un cromosoma x?

Corpúsculo de barr

2.¿Que otro nombre recibe la capa leucoplaquetaria?

Buffy coat

3.Tras centrifugar la sangre,¿en que capa se sitúan los hematíes?

En la capa inferior

Resultados obtenidos:

Valoración de los resultados:

En la sangre estudiada :No hay leucocitos con alteraciones

Observaciones:
No se ha separado bien la sangre, por lo que hay que meterla a la centrifugadora 30 minutos a 1500 rpm , al cabo de ese tiempo tampoco se ve bien  , y hemos tenido que utilizar otro tipo de anticoagulante(heparina)