PRACTICA TINCION SUPRAVITAL CON AZUL DE METILENO 6/11/14

TINCION SUPRAVITAL

MATERIALES:

Microscopio

Portaobjetos

Cubreobjetos

Tubos de hemolisis

Pipeta pasteur

Sellador histologico

papel parafilm

papel de filtro
Sangre venosa
Azul de metileno
Oxalato potásico
Agua destilada
REACTIVOS:
Azul de metileno
Oxalato potásico
Agua destilada
MUESTRA:
Sangre venosa
DESARROLLO:

1. Del frigorífico sacamos la sangre venosa que esta colocada en una bandeja.

2. Movemos la sangre para arriba y para abajo con cuidado, para que no se junten todas las proteínas y no solo salga leucocitos.

3. Quitamos la pinza que tiene la parte superior de la bolsa.

4. Introducimos la goma de la bolsa de sangre dentro del tubo de ensayo.

5. La bolsa de sangre hay que subirla un poco mas arriba que el tubo de ensayo, cuando ya se vea que esta el volumen que se desea, volvemos a bajar la bolsa de sangre.

6. Antes de sacar el tubo de la sangre, cogemos un papel y lo sacamos con cuidado para no manchar la mesa y lo limpiamos.

7. Volvemos a ponerle la pinza, y meterlo en el frigorífico.

8. Depositamos el tubo de ensayo encima de la mesa de trabajo dentro de la gradilla.

9. Lo primero de todo para empezar la práctica es preparar el colorante necesario;

                Azul de Metileno 0,5g.

                Oxalato potásico 1,6g.

                Agua destilada.

10. Para preparar el azul de metileno cogemos un vaso de precipitado y una pipeta de 2ml. Con la ayuda de una pipeta y una prepipeta metemos la pinza en el vaso de precipitado que ya esta lleno de azul de metileno; la pipeta tenemos que enrasarla hasta la línea de enrase y vaciamos en el vaso de matraz aforado la cantidad necesaria.

11. Igual que el 10 pero con el oxalato de potásico 1,6g.

12. Echamos el agua destilada en el matraz aforado hasta la línea de enrase. Tapamos con parafilm y lo movemos con cuidado.

13. Lo que nos ha dado el matraz aforado, lo echamos en un tubo de ensayo.

14. En el portaobjetos añadimos 2 gotas de sangre y 2 gotas del colorante preparado. Seguidamente aspiramos la mezcla con una pipeta pasteur y la depositamos en un tubo de ensayo.

15. Tapamos el tubo con parafilm y dejamos la muestra 10 minutos en reposo.

16. Movemos un poco la mezcla del tubo de ensayo y cogemos dos gotas de la mezcla y la depositamos sobre un portaobjetos.

17. Cubrimos la mezcla con un cubreobjetos.

18. Observamos microscópicamente.

RESULTADO:

Internet HOJA DE TRABAJO:
1.¿En que se diferencia una tincion vital de una supravital?
Tincion vital es aquella que consiste en la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo.
Tincion supravital es aquella que emplean el colorante sobre células o tejidos vivos aislados del organismo.
2.¿Cuales son los colorantes vitales mas utilizados?
El rojo neutro , azul de metileno  y verde de jano
3.¿Que tipo de estructuras tiñe selectivamente el verde jano?
Tiñe mitocondrias y otros orgánulos celulares.
4.¿Cuales son las ventajas de una tinción supravital?
Se pueden ver los glóbulos rojos sin necesidad de un colorante. 5.¿Cuales son los inconvenientes?
Hay que observarlas rápido porque no sobreviven mucho tiempo