PRACTICA TINCION DE GIEMSA 11/11/14

GIEMSA

MATERIALES:
Cristalizable
Pipeta pasteur
Gradilla
Sangre capilar
Microscopio
Portaobjetos
Pipeta graduada
Agua destilada
Tubos de ensayo
Puentes de tincion
Metanol
Aceite de inmersion
Tampon ph 7.2
Colorante de Giemsa

REACTIVOS:
Aceite de inmersión
Colorante de Giemsa
Tampón pH 7.2
Metanol

MUESTRA:
Sangre venosa

DESARROLLO:

1. Del frigorífico sacamos la sangre venosa que esta colocada en una bandeja.

2. Movemos la sangre para arriba y para abajo con cuidado, para que no se junten todas las proteínas y no solo salga leucocitos.

3. Quitamos la pinza que tiene la parte superior de la bolsa.

4. Introducimos la goma de la bolsa de sangre dentro del tubo de ensayo.

5. La bolsa de sangre hay que subirla un poco mas arriba que el tubo de ensayo, cuando ya se vea que esta el volumen que se desea, volvemos a bajar la bolsa de sangre.

6. Antes de sacar el tubo de la sangre, cogemos un papel y lo sacamos con cuidado para no manchar la mesa y lo limpiamos.

7. Volvemos a ponerle la pinza, y meterlo en el frigorífico.

8. Depositamos el tubo de ensayo encima de la mesa de trabajo dentro de la gradilla.

9. Con un cubreobjetos en la mesa, vamos añadiendo 5ml de sangre (1 gota aproximadamente) en el filo del portaobjetos. Con otro portaobjetos, vamos extendiendo la gota.

10. Colocamos el frotis obtenido en un cristalizador horizontal.

11. Cubrimos el frotis con metanol durante 3 minutos. Pasado ese tiempo lo escurrimos y lo dejamos secar al aire libre.

12. Con el proceso anterior, conseguimos dejar el frotis fijo.

13. Con una micropipeta (de punta amarilla) de 200ul, cogemos los 0.2ml (200ul) de eosina-azul de metileno. Hacemos lo mismo con una pipeta de 2ml y cogemos 2ml de tampón pH 7.2. Todo esto lo depositamos en un tubo de ensayo.

14. Mezclamos el tubo suavemente.

15. Con una pipeta paseteur cogemos un poco de la mezcla y la depositamos encima del frotis cubriéndolo completamente, durante unos 20-25 minutos.

16. Escurrimos y lavamos con agua del grifo.

17. Lavamos con tampón pH 7.2 hasta eliminar los restos del colorante.

18. Lo dejamos escurrir y secar en posición vertical.

19. Una vez seca la muestra, añadimos aceite de inmersión y lo vemos microscópicamente con el objetivo de 100x.

RESULTADOS:
Bacterias :azul
Eritrocitos:rosa-asalmonado
Plaquetas:violeta

HOJA DE TRABAJO:
1.¿Cuales son los anticoagulantes mas adecuados para esta tecnica?
Heparina o EDTA.
2.¿Con que reactivo fijamos el frotis?
Colorante de Giemsa.
3.¿Cuanto tiempo debe actuar el colorante en el frotis?
Debe estar 25 minutos
OBSERVACIONES
Se consiguen ver los componentes de la sangre.