PRACTICA TINCION DE WRIGHT 13/11/14

WRIGHT

MATERIALES:
Tubos de ensayo
Cristalizador
Puentes de tincion
Pipeta pasteur
Microscopio
Agua destilada
Papel de fieltro
azul de metileno
tampon
aceite de inmersión
Sangre venosa
Gradilla
Lanceta
Portaobjetos

REACTIVOS:
Eosina-azul de metileno
Tampon ph 7.2
Aceite de inmersión

MUESTRA:
Sangre venosa

DESARROLLO:

1. Del frigorífico sacamos la sangre venosa que esta colocada en una bandeja.

2. Movemos la sangre para arriba y para abajo con cuidado, para que no se junten todas las proteínas y no solo salga leucocitos.

3. Quitamos la pinza que tiene la parte superior de la bolsa.

4. Introducimos la goma de la bolsa de sangre dentro del tubo de ensayo.

5. La bolsa de sangre hay que subirla un poco mas arriba que el tubo de ensayo, cuando ya se vea que esta el volumen que se desea, volvemos a bajar la bolsa de sangre.

6. Antes de sacar el tubo de la sangre, cogemos un papel y lo sacamos con cuidado para no manchar la mesa y lo limpiamos.

7. Volvemos a ponerle la pinza, y meterlo en el frigorífico.

8. Depositamos el tubo de ensayo encima de la mesa de trabajo dentro de la gradilla.

9. Con un cubreobjetos en la mesa, vamos añadiendo 5ml de sangre (1 gota aproximadamente) en el filo del portaobjetos. Con otro portaobjetos, vamos extendiendo la gota como se muestra en la foto siguiente.

10. Colocamos el frotis obtenido como se muestra en la foto siguiente.

11. Vertemos sobre el frotis 1ml de eosina-azul de metileno con la ayuda de una pipeta pasteur.

12. Dejamos actuar 1 minuto y lo lavamos con solución tampón pH 7.2

13. Dejamos escurrir y secar en posición vertical.

14. En un tubo de ensayo diluimos 0.5ml de eosina-azul de metileno con 0.5m de solución tampón pH 7.2. Lo mezclamos bien y cubrimos con esta solución la extensión.

15. Teñimos durante 3-5 minutos y lavamos con agua del grifo.

16. Lavamos otra vez con tampón pH 7.2. Lo dejamos escurrir y secar en posición vertical.

17. Añadimos una gota de aceite de inmersión para verlo en el microscopio con el objetivo a 100x.

RESULTADOS:

HOJA DE TRABAJO
1.¿Que tipo de colorante utilizamos en esta tincion?
Colorante de eosina-azul de metileno.
2.¿Que sustancia empleamos como fijador?
El metanol.
3.¿Cuanto tiempo debe estar en contacto el frotis con el colorante diluido?
DE 3 a 5 minutos.