PRACTICA:DETERMINACION DE UN Du

MATERIAL:

Centrifuga

Tubos de centrifuga

Pipeta pasteur

Gradilla

Vaso de precipitado para residuos

Baño maría

Reloj

Papel de fieltro
Bata
Guantes

REACTIVOS:

• Suero anti-D humano
• Suero antiglobulina humana al conejo
• Solución salina fisiológica

MUESTRA:

Hematíes 

FUNDAMENTO:

El D es un antígeno débil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación de Rh .Por ello debemos sensibilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti-D,y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs.Si existe el antígeno D en la superficie de los eritrocitos ,se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana y en la segunda fase darán lugar a la aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana

DESARROLLO:

1.Lavamos tres veces los hematíes con solución salina fisiológica

2.Tomamos 0.5 ml de sangre problema y la llenamos a un tubo de centrifuga

3.Completamos el tubo con solución salina y agitamos suavemente

4.Centrifugamos durante 4 minutos a 2.000 rpm 

5.Retiramos el sobrenadante y repetimos dos veces mas el proceso
6.Colocamos una gota  de suero anti-D y una gota de la suspensión de hematíes al 5%
7.Mezclamos suavemente 
8. Incubamos a 37 grados durante 30-45 minutos
9.Echamos solución salina en el tubo y centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto (2 veces )
10.Añadimos sobre el sedimento hemático una gota de suero de Coombs y lo mezclamos suavemente
11.Centrifugamos durante 1 minuto a 1000 rpm 
12.Golpeamos suavemente los tubos


EN CASO DE DAR EL RESULTADO NEGATIVO SE HACE OTRA APARTE DE LA TÉCNICA 1
1.Cogemos una gota de los hematíes lavados y los añadimos en un tubo 
2.Echamos suero fisiológico y centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto (2 o 3 veces)
3.Resuspendemos el sedimento
4.Añadimos suero antiglobulina , y centrifugamos a 3500 rpm durante 30 segundos
5.Por ultimo leemos los resultados

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS
Lo observamos con la lámpara de luz

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

• Existe aglutinación, cuando el resultado es positivo: Indica que en la membrana de los hematíes hay antígeno D y se clasifica la sangre como Rh positivo variante D
• No existe aglutinación cuando se clasificara la sangre como un Rh negativo

HOJA DE TRABAJO:
1.¿Que contiene el suero de Coombs?
Suero antiglobulina humana
2.¿Que se detecta con la prueba directa?
Se detecta el antígeno D
3.¿Que podemos detectar con la prueba indirecta?
La presencia del antígeno en la membrana del hematie
4.¿Que buscamos en la sangre del paciente?
Aglutinación en presencia del suero
5.¿Que ocurre si el control es positivo?
Indica que en la membrana de los hematíes hay antígeno D

RESULTADOS OBTENIDOS:

	Aglutinación
Sección S  -
Sección A   -

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:
La sangre es:No presenta aglutinación , por lo que seria Rh negativo

PRACTICA:DETERMINACION DEL FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA Rh

MATERIAL:

Centrifuga
Rotulador
Vaso de precipitado para residuos
Tubos de centrifuga
Pipeta pasteur
Papel de fieltro
Bata
Guantes
REACTIVOS:

• Suero anti-D
• Suero anti-E
• Suero anti-C
• Suero anti-e
• Suero anti-c
• Solución salina fisiológica

MUESTRA:
Suspensión de hematíes lavados al 5% de solución salina fisiológica
FUNDAMENTO:
Podemos investigar el genotipo del sistema Rh enfrentando los hematíes problema a distintos antisueros dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh
La existencia o no de estos antígenos en la superficie de los hematíes se detecta por una reacción de aglutinación.Los resultados de estas reacciones se trasladan a una tabla donde podemos ver los posibles genotipos correspondientes
DESARROLLO:

1.Lavamos tres veces los hematíes con solución salina fisiológica

2.Tomamos 0.5 ml de sangre problema y la llenamos a un tubo de centrifuga

3.Completamos el tubo con solución salina y agitamos suavemente

4.Centrifugamos durante 4 minutos a 2.000 rpm 

5.Retiramos el sobrenadante y repetimos dos veces mas el proceso
6.Rotulamos los 5 tubos de centrifuga , cada uno con la letra D,C,E,c y e
7.Añadimos una gota de antisuero y una gota de suspensión de hematíes al 5%
8.Movemos suavemente
9.Centrifugamos durante 1 minuto a 1000 rpm
10.Golpeamos suavemente los tubos 

RESULTADO:
LECTURA DE LOS RESULTADOS

• El resultado es positivo:Es la presencia de aglutinacion y se observa con la presencia de grumos rojos sobre un  claro
• La ausencia de aglutinacion es un resultado negativo:Se observa como la suspension homogenea de los hematies en un liquido rojizo

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
Un resultado positivo indica la presencia del antígeno del sistema Rh buscando en ese tubo.
Los cinco resultados obtenidos expresan el fenotipo de la sangre analizada y se comparan con los contenidos en la tabla de fenotipos y genotipos del sistema Rh que se encuentran


La sangre analizada es Rh negativo, se puede determinar su único genotipo posible con respecto al sistema Rh. Sin embargo , si la sangre es Rh positiva ,existen varios genotipos posibles que dan lugar al fenotipo previamente detectado
HOJA DE TRABAJO:
1.¿Que antisueros se utilizan en esta técnica?

• Suero anti-D
• Suero anti-E
• Suero anti-C
• Suero anti-e
• Suero anti-c

2.¿Por que no existe suero anti-D?
Por que el antígeno & es nulo 3.¿Que expresan los cinco resultados obtenidos?
Fenotipo
4.Si la sangre es Rh +¿puede determinarse exactamente su genotipo con respecto al sistema Rh?
Existen varios genotipos posibles
5.Si los resultados obtenidos son :D-,D-,E+,c+,e-¿Cuales es el genotipo posible de esta sangre?
dcE/dcE

RESULTADOS OBTENIDOS:

Tubo	Aglutinación
D	-
C	+
E	+
C	+
e	+

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:
El genotipo posible del sistema Rh en la sangre analizada es:dCe/dcE y dCE/dce

PRACTICA:DETERMINACION DEL GRUPO Rh EN TUBO

MATERIAL:

Centrifuga

Tubos de centrifuga

Rotulador

Gradilla

Pipeta pasteur

Vaso de precipitado para residuos
Bata
Guantes

REACTIVOS:

• Suero anti-D
• Albumina bovina al 30%
• Solución salina fisiológica al 0.9%

MUESTRA:

Hematíes problema

FUNDAMENTO:

Ponemos en manifiesto la presencia del antígeno D en la superficie de los hematíes mediante su enfrentamiento a un suero anti-D

DESARROLLO:

1.Lavamos tres veces los hematíes con solución salina fisiológica

2.Tomamos 0.5 ml de sangre problema y la llenamos a un tubo de centrifuga

3.Completamos el tubo con solución salina y agitamos suavemente

4.Centrifugamos durante 4 minutos a 2.000 rpm 

5.Retiramos el sobrenadante y repetimos dos veces mas el proceso

6.Rotulamos dos tubos con las letras D y A

7.En el tubo D añadimos una gota de suero anti-D 

8.En el tubo A ponemos una gota de albumina bovina al 30%

9.A cada tubo le añadimos una gota de suspensión de hematíes al 5%

10.Agitamos los hematíes suavemente

11.Centrifugamos durante 1 minuto a 1.000 rpm o 30 segundos a 3.500 rpm

12.Golpeamos suavemente el fondo de los tubos 

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

• Aglutinación positiva:Si se forman grumos de color rojo en un liquido claro
• Aglutinación negativa:Si se resuspenden homogéneamente los hematíes 

El tubo con albumina es un control negativo,y debe dar siempre ausencia de aglutinación. 

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

• Si el tubo D presenta aglutinación y el tubo A no decimos que el paciente es Rh positivo
• Si no se produce aglutinación en ninguno de los dos tubos procedemos a incubar ambos a 37 grados durante media hora.Posteriormente centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto 
• En el caso de persistir negatividad comprobaremos que el paciente no posee un D mediante una prueba de coombs indirecta

HOJA DE TRABAJO:

1.¿Por que utilizamos el control de albumina?

Porque los hematíes revestirse en in vivo de anticuerpos en presencia de producir una agregación que daría la idea de una aglutinación positiva

2.¿Que ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D?

Que aparece Coombs indirecta

3.¿Que debemos detectar mediante un Coombs indirecto?

Que el paciente no posee un D 

4.¿Como  se prepara la muestra problema?

• Lavamos tres veces los hematíes con solución salina fisiológica
• Tomamos 0.5 ml de sangre problema y la llenamos a un tubo de centrifuga
• Completamos el tubo con solución salina y agitamos suavemente
• Centrifugamos durante 4 minutos a 2.000 rpm 
• Retiramos el sobrenadante y repetimos dos veces mas el proceso

RESULTADOS OBTENIDOS:

	Aglutinación
Sección S 18
Sección A 2

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:

La sangre analizada es:Rh positivo

PRACTICA:DETERMINACION DEL GRUPO Rh EN PORTA

MATERIAL:

Visualizador luminoso

Palillos

Rotulador

Pipeta pasteur

Portaobjetos

Vaso de precipitado para residuos
Bata 
Guantes

REACTIVOS:

• Suero anti-D
• Albumina bovina al 30%

MUESTRA:

Sangre anticoagulada

FUNDAMENTO:

La técnica esta basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema,empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-D
En el caso que tengan antígeno D se producirá una aglutinación que puede observarse a simple vista

DESARROLLO:
1.Dividimos un portaobjetos en dos secciones con un rotulador y lo rotulamos con una letra S y A
2.En la sección S colocamos dos gotas del suero anti-D
3.En la sección A colocamos dos gotas de albumina bovina al 30%
4.Añadimos una gota de sangre en cada una de las secciones y las mezclamos con palillos distintos
5.Colocamos el portaobjetos debajo del visualizador luminoso y lo vamos balanceando para favorecer la mezcla de sangre y reactivos

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS
Esperamos dos minutos antes de dar el resultado de la prueba

• Aglutinación positiva: Aparición de grumos rojos sobre un fondo claro.No deben confundirse con pequeños coágulos de fibrina presentes en la muestra
• Aglutinación negativa:La mezcla da lugar a una suspensión homogénea de los hematíes

La mezcla de sangre con albumina bovina debe dar siempre aglutinación negativa.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS
Los resultados se presentan de la siguiente manera:

Sección S	Sección A	Interpretación
+	-	Rh positivo
-	-	Rh negativo
+	+	¿?

-=Aglutinación negativa
+=Aglutinación positiva
¿?=No puede interpretar

HOJA DE TRABAJO:
1.¿Que tipo de muestra empleamos en este técnica?
Sangre total anticoagulada
2.¿Para que se utiliza el visualizador?
Para observar el resultado de la reacción
3.¿Que puede dar lugar a falsas aglutinaciones?
La mezcla de sangre con albumina bovina
4.¿Que ocurre si aglutina la sección A?
No se puede informar los resultados ,esta sección debe ser negativa

RESULTADOS OBTENIDOS:

	Aglutinación
Sección S	18
Sección A	2

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:

LA sangre analizada es:Rh positivo

PRACTICA:DETERMINACION SERICA DEL GRUPO ABO

MATERIAL:

Tubo de centrifuga

Pipeta pasteur

Baño maría

Centrifuga

Reloj

Rotulador

Papel de fieltro

Gradilla
Guantes
Micropipeta
Puntas de micropipeta
Vaso de precipitado 
Vaso de precipitado para residuos
Para film
Bata
Guantes

REACTIVOS:

• Hematíes del grupo A1
• Hematíes del grupo A2
• Hematíes del grupo B
• Hematíes del grupo 0
• Hematíes de la sangre problema

MUESTRA:

Suero

FUNDAMENTO:

El suero de un individuo solo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no están presentes en sus propios hematíes.Por ello,al hacer reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B,solo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentado a eritrocitos con antígenos distintos a los de sus propios hematíes.

Esta técnica puede realizarse tanto en porta como en tubo,aunque se prefiere la determinación en tubo porque la centrifugación de los hematíes intensifica el fenómeno de aglutinación

DESARROLLO:

1.Cogemos un 1 ml de sangre con una micropipeta y echamos una cantidad de suero salino

2.Centrifugamos los tubos a 2.000 rpm durante 4 minutos

3.Retiramos el sobrenadante

4.Repetimos dos veces mas el proceso anterior

5.Añadimos en otros 4 tubos dos gotas de sangre de cada grupo y 5 ml de suero fisiológico

6.Rotulamos un tubo de centrifuga con la letra A1; A2;B;0

7.Añadimos a cada tubo dos gotas de suero problema

8.Depositamos una gota de la suspensión de hematíes que se corresponderá con la letra del tubo rotulado.

9.Agitamos suavemente y centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto

11.Golpeamos suavemente el extremo inferior de los tubos 

RESULTADO:

LECTURA DE LOS RESULTADOS

• Si aparecen unos grumos rojos flotando en un liquido claro indica que existe aglutinación.
• En el caso contrario, los hematíes se resuspenden homogéneamente dando lugar a un liquido de color rojizo

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

El grupo eritrocitario que se asignara,atendiendo a los resultados obtenidos,se puede ver en el siguiente cuadro:

Tubo A1	Tubo A2	Tubo B	Tubo 0	Tubo C	ac presentes en el suero	Grupo eritrocitario
-	-	+	-	-	Anti-B	A1
- o +*	-	+	-	-	Anti –B y anti-A	A2
+	+	-	-	-	Anti-A	B
+	+	+	-	-	Anti-A y anti-B	0
-	-	-	-	-	Ninguno	A1B
-o+”	-	-	-	-	Niguno o anti-A1	A2B
+	+	+	+	+	Autoanticuerpos	Initerpretable

+=Aglutinación

-=No aglutinación

*=Este anti-A1 se encuentra solo en un 2% de los individuos A2

0=Este resultado se observa solo en el 25% de los individuos A2B

ES difícil confirmar el grupo sanguíneo por esta técnica en el caso los recién nacidos ,ya que sus anticuerpos no están bien desarrollados aun.También encontramos dificultades en los pacientes con agammaglobulinemia,ya que carecen de anticuerpos y en aquellos que poseen otros anticuerpos específicos o inespecificos capaces de reaccionar con los antígenos del grupo ABO

HOJA DE TRABAJO:

1.¿Que son los hematíes tipados?

Los hematíes tipados suelen ser los grupos A,B y 0

2.¿A que dilucion empleamos los hematíes del paciente?

5%

3.¿Que clase de muestra se emplea en esta técnica?

Suero

4.¿Que ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación?

Puede ser: Si esta en suero es anticuerpos y si es del grupo eritrocitario es ininterpetable

RESULTADOS OBTENIDOS:

	Aglutinación	No aglutinación
Tubo A1		-
Tubo A2		-
Tubo B	+
Tubo 0		-
Tubo C		-

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS:

• Los AC encontrados en el suero son:Anti-B
• El grupo eritrocitario de la sangre amalizada es:AB
• Da lugar al grupo eritrocitario A1  y ac presentes en el suero Anti-B

OBSERVACIONES:

Nos han salido las dos veces negativas , la primera la hemos echo con los hematíes de suspensión de 2.5% , con dos gotas de suero y la segunda vez la hemos echo con 6 gotas de hematíes y 2 de suero y tampoco ha salido aglutinación